郁金香花卉栽培论文 郁金香花卉栽培论文怎么写

其实郁金香花卉栽培论文的问题并不复杂，但是又很多的朋友都不太了解郁金香花卉栽培论文怎么写，因此呢，今天小编就来为大家分享郁金香花卉栽培论文的一些知识，希望可以帮助到大家，下面我们一起来看看这个问题的分析吧！

本文目录

1. 郁金香怎样繁殖
2. 花卉栽培生态条件及各有什么作用
3. 植物组织培养小论文方向

郁金香怎样繁殖

问题一：郁金香怎么大量繁殖？切花用郁金香鳞茎主要用培养小鳞茎的方法获得适宜于作切花促成栽培用的材料。首先应选择适宜地点。适宜郁金香生长的生态环境应阳光充足，春季冷凉时期长，最适宜的营养生长温度为10℃，空气湿度较高，夏季来临迟，而且没有酷暑，同时相对湿度较低，冬季又有一段相当长的低温。此种环境既有利于营养生长期光合作用产物的积累，促使种球能迅速增大，又能使球茎在夏季休眠中为内部分化提供较合理的温度条件。对土壤肥力要求不很高，但应土质疏松且排水良好，同时有较好的保水性。一般以沙壤土较为理想。最适宜的环境为土壤氢离子浓度100～316.5nmol/L（pH6.5～7），疏松肥沃而排水良好的山坡、丘陵地，通常海拔较高的山地更为适宜。培养用地最忌低温粘重土壤。小球栽种以前，应在土壤中施入足够的有机肥料。可施入腐熟的牲畜粪肥10kg/m2，同时将加入相当于有机肥重量4％的硫酸钾＋骨粉（各1/2）。土壤深翻应在40cm以上。下种前几天，在整好的土地上浇透水。下种以后，不要马上灌水，这样才能诱导鳞茎向深处扎根，有利于来年更好的生长发育。腐熟人粪尿或牛粪，每100平方米用800～1000千克，并增加骨粉20千克均匀翻入土中。耕作层应维持在不少于20cm。

用母球周围分生的小球茎培养成大的切花用栽培材料。直径1厘米左右的球需要培养两个7生长季；直径1.5～2厘米的球，培养一年就可以达到周长12厘米的生产用球1、栽种密度小子球栽种密度一般为100～200个/平方米，根据子球大小，略有波动。周长大于6厘米的小子球，应保持在150个/平方米以下，小子球5cm×10cm。2、栽种深度子球栽种深度应根据球的大小而定，越大的子球，种得越深。一般从球顶至土表的高度相当于球的周长。为鳞茎直径的3倍。3、栽种时间以入冬前30～40天为宜。在北京地区大约为9月下旬至10月上中旬。具体的下种时间应根据当年的温度变化情况而定。以入冬前能充分发根，但芽不出土为适当。因为根生长的温度在5??C以上。若晚种，小球在严冬季节往往不能生根，迟至一年春季才发根、长芽，在短暂的春季中也就大大缩短了郁金香的生长发育的时间，不利于球茎的增大。入冬以前应浇一次防冻水，以利于小球越冬。4、施肥管理从郁金香中的营养成分变化来看，可以了解到氮、磷、钾、钙的养分，在母球中至开花期就减少了75％，开花后母球四周营养全部消耗完；在茎叶中，开花前营养不断增加，开花后急剧下降；在更新球中，营养在母球开花后迅速增加，新球不断增大， 新球发育过程中需要补充大量的营养元素。子球生长所需养分的量要比切花生长所需的量多。 不但要施足基肥，还应在小球生长期间给予若干次追肥。在国外有商品化的郁金香专用肥料用来进行根外追肥。如自己配肥，根据郁金香生长发育的一般规律，可在萌芽初期追施氮磷肥，施肥量以40～60克/平方米为宜，氮磷比例为N:P2O5＝2:1.5即可。现蕾及开花以后，可追施磷钾肥3～4次，每次30～40克/平方米，基本上是磷肥，钾肥各半。开春土壤解冻后,叶芽出土时起，每2周追一次肥，用浓度1～2％硝酸钙或硝酸钾水溶液作土壤灌溉。5、水分管理郁金香种球栽培应采用喷灌浇水，不宜漫灌。这样有利于维持土壤湿度稳定，并可使局部环境凉爽。若土壤墒情适当，可不必立即灌溉，鳞茎即能自然发根,入冬前后,无地上部分生长。在冬季干燥地区，入冬前应灌溉一次.进入休眠前2～3周,停止水肥，整个春天的生长季中，可追肥5～6次。灌水与追肥相结合，用量适中，使土壤基质始终保持既湿润又有良好的同期状态，防......>>

问题二：郁金香用什么繁殖后代郁金香可以用分球或者播种来繁殖。

分球如果用大球，栽后当年可开花，小仔球需要培养1-2年才能开花。播种，需要3-4年才能开花。

问题三：郁金香花的养殖方法？繁殖常用分球繁殖，以分离小鳞茎法为主。秋季9~10月分栽小球。母球为一年生，即每年更新，花后在鳞茎基部发育成1~3个次年能开花的新鳞茎和2~6个小球，母球干枯。母球鳞叶内生出一个新球及数个子球，发生子球的多少因品种不同而异，与栽培条件也有关，新球与子球的膨大常在开花后一个月的时间内完成。可于6月上旬将休眠鳞茎挖起，去泥，贮藏于干燥、通风和20~22℃温度条件下，有利于鳞茎花芽分化。分离出大鳞茎上的子球放在5~10℃的通风处贮存，秋季9~10月栽种，栽培地应施入充足的腐叶土和适量的磷、钾肥作基肥。植球后覆土5~7厘米即可。

秋季露地播种，深度1~1.5厘米。母球鳞叶内发生子球的多少，因品种不同而异，与栽培条件也有关。次春可发芽，四至五年才能开花。新球与子球的膨大，常在开花后一个月的时间内完成。

郁金香的常规栽培地栽要求排水良好的砂质土壤，pH6.6~7，深耕整地，以腐熟牛粪及腐叶土等作基肥，并施少量磷、钾肥，作畦栽植，栽植深度10~12厘米。一般于出苗后、花蕾形成期及开花后进行追肥。冬季鳞茎生根，春季开花前，追肥2次。3月底至4月初开花，6月初地上部叶片枯黄进入休眠。生长过程中一般不必浇水，保持土壤湿润即可，天旱时适当浇些水。其栽培管理要点基本与风信子相同；只是郁金香品种间易杂交使品种混杂，应注意隔离栽植。郁金香鳞茎含淀粉多，贮藏期间易被老鼠吃掉，应注意收藏。

郁金香属于鳞茎植物，它需要经过一定的低温阶段，并在花茎充分生长后才能正常开花。

常规栽培是一般的栽培方式，是没有对郁金香鳞茎进行过冷处理的栽培方式。

一.栽培前的准备在种植郁金香前，需要制定一个完整的生产计划，计划包括选择整理种植场地、如何获得郁金香种球生产用具准备，盆栽的还得准备配制盆土和容器。

郁金香鳞茎应该种植在土层深厚、肥沃的沙性土壤中，其根系生长最忌积水，选择的地势一定要排水通畅。种植畦，畦宽一般为沟深 30厘米，地势平坦的地方开沟应深一些。第一年种植的土壤如果土质较粘，可以每100平方米用两个立方泥炭和5公斤复合肥做底肥进行土壤改良。郁金香不宜连作，前一两年种植过郁金香的土地最好不再进行种植。种植郁金香前的一个月应对土地进行深翻暴晒，消灭病菌孢子，并除去杂草。然后选择晴朗天气，用40%福尔马林100倍液浇灌(深度达10厘米以上)土壤消毒后用薄膜覆盖，覆盖时间在一周左右。揭膜之后，把土整细，准备种植。

二.栽植栽种在向阳排水好的沙壤土中，一般土温稳定低于12℃以下时可以考虑种植。深耕后宜施用腐熟的牛粪和其他的磷钾肥(每平方米施用五氧化二磷7~10克氧化钾1 3~15克)入土深度约为鳞茎高度的2倍，株行距为鳞茎横径的2~3倍，覆土后不再浇水，但须加盖谷草，以提高土壤湿度并防止土壤板结。待幼芽刚出土展叶前，施1次稀薄的氮肥；现蕾后加大肥料浓度(10%肥90%水)。生长期间一般不浇水，只要保持土壤湿润即可，若天气干旱，可浇1~2次透水(湿润深度15厘米左右)。作为切花使用的，应在花蕾完全变色时剪取，瓶插的观赏期约10天。

种球栽种前应进行消毒处理，可用高锰酸钾溶液或福尔马林溶液浸放30分钟，晾干后种植。生产性种植的密度可以控制在12×12厘米或13×12厘米，根据品种不同而略有差异。一般叶片直立性强，植株矮小的品种可以适当密植。

如果是展览性种植，可以放到20~25厘米，栽植的深度为种球顶距土表4~5厘米。栽培后浇一次透水，以防止干燥脱水。郁金香多为盆栽观赏，作地被植物及药用。

养护要点

郁金香耐寒性强，冬季可耐-35℃的低温，5......>>

问题四：怎样才能让开过花的郁金香下一年在开花繁殖呢？我国也就东北那边有条件模拟荷兰的气候，一般地方不行，太热了

问题五：如何种好郁金香？郁金香十分难种,他的繁殖方法主要是球茎繁殖，种子繁殖有一定困难具体方法如下：【介质】适合生长于排水性较佳之砂质土壤中，以一般壤土、沙土、有机土、细蛇木屑 4:3:2:1比例混合；郁金香不可种植于过分潮湿环境，且千万不能使介质积水，否则容易出现介质发霉或鳞茎腐烂现象，种植者不可不慎。【光线】鳞茎刚种植覆土之后，先放置在室外阴凉通风处，约莫一周之后等其发根，就可以接受较充足之光线，需要明亮的光线或部份日照，因此适合种在户外以半遮阴或间接方式接受光线。若种植于室内容易突长，且植株瘦弱，叶片偏黄。郁金香花朵对光线非常敏感，早上九点多点至下午三点多是盛开的，其它时间或是阴天时皆呈现（半）闭合状态。【温度】郁金香鳞茎种植前需经过冷藏催化处理（摄氏4度左右），以促使发根开花，目前花市贩卖之鳞茎，在空运来台之前通常已经经过冷藏处理，因此可直接种植；植株生长发育适温介于摄氏18~22度之间，因此本省无法一年四季令其生长良好。由于冬季较阴冷，比较适合郁金香生长，南部则四季如夏，郁金香容易适应不良。【水分】郁金香对于水分要求适量即可，过量或太少皆对其构成威胁；鳞茎刚植入介质后，约每3天浇水一次，发根长叶开始日照后，可视天气状况晴天1~2天浇水一次，阴雨天则待介质表层干燥后再行浇水，浇水重点在于别让水分淤塞于盆内，也不宜使介质完全干燥。【施肥】以腐熟有机肥料或缓效型肥料为基本肥料混合于栽培介质中，持续提供其生长所需要的养分。因为生长期短，生长期间不需另外追加三要素化学肥料。【繁殖】1.时机：以每年冬~春天较佳，约介于十二月到来年二月。2.步骤：a.将球茎冷藏于冰箱约1~1.5个月。(若已冷藏催化过就可直接种植)b.调配介质于盆栽当中。c.约三寂柚忠豢牛五寂柚种擦娇拧d.浇水置于通风阴量处。e.一周后开始接受日照。3.欲花朵壮硕宜选用较大种球种植；若用子球种植，花朵较小。4.一般冷冻较久之球茎较早开花。5.由种植到开花约一个半月。【修整与换盆】由于郁金香寿命短暂，因此生长发育期间通常无须修整或换盆；花朵枯萎后，已无任何利用价值。秘诀1.郁金香的选购：选择球茎饱满结实硕大，无任虫病侵袭迹象，无发霉现象。若要欣赏各种样式颜色的花朵，宜多样选购；若要整齐化一，蔚为一片花海，宜少样多量。2.郁金香以盆栽种植为宜，花坛亦适合，但若直接种于户外苗圃庭园中，由于环境因子较难控制，因此需承担更多风险。3.不适合种于室内，因为光线不足，生长会不佳进而影响开花，可于开花后再移入室内观赏，但最好置于窗台边接受明亮光线，否则容易缩短花的寿命。4.可针对平日少见品种花色予以搜集或与其它同好交换。由于园艺上杂交品种繁多，因此搜集其来可谓一大乐趣。5.球茎种植前需冷藏催化处理，置于摄氏4度左右冷藏40天，目前一般市售之球茎多已经过处理，因此无须再处理即可直接种植；一般以冷藏较久之球茎开花较早。6.本省中北部冬天气候较适合其生长，南部由于温度过高，容易导致开花不良。7.开花期间应减少浇水，更应避免直接浇灌于花瓣上，否则花期会缩短。8.种植郁金香最常出现腐烂或发霉现象，往往由于种植者求好心切，一日照三餐浇水所致，或由于介质不净引发病虫滋生，或由于置于户外遭蚂蚁啃蚀。

问题六：郁金香的繁殖方法常用分球和播种繁殖。分球繁殖当年栽植的母球经过一季生长后，在其周围同时又能分生出1-2个大鳞茎和3-5个小鳞茎。可按种球大小分开种植，大球栽后当年可开花，小仔球培养1-2年也能开花。播种繁殖郁金香的播种繁殖，多用于培育新品种。种子在蒴果成熟开裂前采收，沙藏到10月在室内盆播。保持湿润，翌年春季才发芽。约3-4年开花。

问题七：需要大量快速地繁殖郁金香,以下哪种方法最好当然是组织培养了，快速繁殖的最佳方法，小小的一块组织就能长出很多植株。

郁金香本来就是用球茎进行的无性繁殖，不能A.扦插。B嫁接 C压条，因为草本，没有枝条可以进行什么扦插压条。

问题八：郁金香花的不同颜色是怎么培育出来的一般情况下，首先使用的是常规杂交，也就是将不同花色的郁金香进行杂交，即可获得新花色。此外还有杂种优势杂交。

但郁金香是用球茎繁殖的，也就是营养器官繁殖，所以发生的自然变异几率很大（芽变），完全可以从中选择出良好的花色。

毋庸置疑，转基因可以得到新的花色，这和基因的表达程度、表达水平有关。RNA干扰（RNAi）是最普遍的方法，花色会因干扰程度的深浅而呈现不同的颜色。这样的例子可以参考矮牵牛，目前研究这个的人比较多，出的论文也比较多。

问题九：北方露天郁金香的养殖方法郁金香花姿高贵典雅，许多普通消费者因它娇贵难养而敬而远之。其实，郁金香难养主要是因它的种球培养过程需要夏季冷凉的气候环境，我国大部分地区不适宜。而买一个种球栽培，让它在家中开花，做起来并不难，养得好，第二年还能再开花呢。爱花的您何不栽盆试试?挑选种球应选球径4厘米以上，即周长12厘米以上饱满健壮的大球，才能保证开花。可购买不同花色搭配种植。商品种球大多经过4℃至5℃低温处理，买回后立即播种，60天至70天可开花。购买种球应选合适的时机，要想元旦、春节前后开花，则应在9月至10月购买，但出叶后需加温补光。家庭最好在10月下旬到11月购买，栽后冬季长根，春季出叶，4月至5月开花，顺应自然环境，好养好管。郁金香喜冬季温暖湿润、夏季凉爽干燥的气候，喜光，耐半阴，叶片出土后要多晒太阳。适宜生长温度15℃至20℃，冬季鳞茎可耐- 35℃低温，夏季30℃叶片枯萎。生长期盆土应保持湿润，忌积水。喜疏松肥沃的沙壤土，pH值为6.5至7。施肥用全元素复合肥或腐殖酸液肥较好。栽培提示10月至11月：栽植种球可用口径10厘米至20厘米花盆。盆底垫3厘米厚左右木炭渣、砖石粒、陶粒等作排水层，加入疏松肥沃的中性土。注意要用新土，栽过百合科植物和球根花卉的旧土不能用，以防病毒、线虫等感染。口径10厘米至15厘米花盆每盆种1球至2球，18厘米至20厘米花盆每盆种3球至5球，栽时种球顶部与土面平齐即可。栽后放阴处3日至5日，浇透水后放室外冷凉处。当盆土表面1厘米以下见干时要浇水。12月至翌年2月：严寒季节可用泡沫塑料等将花盆包住，放室外背风向阳处，5℃以上根系可生长。盆土不干不浇，浇则浇透。3月至4月：3月出芽。15℃至18℃为茎叶生长旺盛期，要放在阳光下养护。每周浇一次1‰全元素复合肥。每天可用温水喷洒叶面1次至2次。花蕾出现后，要常向盆花周围地面洒水，以增加空气湿度。4月至 5月可开花。5月至6月：一般在花后就可将植株丢弃。山区和高原地区有得天独厚的条件，可继续养护。一般地区对于春节前后开花的植株，花后还有两个多月的适宜生长期，如有兴趣也可继续再养一年。方法是：花朵萎蔫后即剪去花头，保留花梗，使养分向新鳞茎转移。将花盆放在凉爽通风、光照充足处，每10天浇一次1‰全元素复合肥水溶液，促进新鳞茎长大。叶片萎蔫后仍需保持盆土湿润半月左右。7月至9月：停水停肥，放冷凉处让鳞茎休眠。10月挖出鳞茎，如新鳞茎的直径有3厘米以上，可重新播种，按初栽种球管理方法进行养护，翌年4月可望二次开花。播种繁殖需4年才可开花。也可用小鳞茎繁殖，但在我国大部分地区无繁殖的自然条件。您要喜欢它，就需要年年购买种球了。

花卉栽培生态条件及各有什么作用

（一）露地花卉

在自然条件下，在露地完成其整个生命周期的花卉。� 1．一年生花卉：在一年内完成其生长、发育、开花、结实、直至死亡的生命周期。即春天播种、夏秋开花、结实、后枯死。故又称春播花卉。如鸡冠花、波斯菊、硫华菊、翠菊、百日草、万寿菊、孔雀草、茑萝、千日红、麦杆菊、一串红、半支莲、五色草大花秋葵、藿香蓟、凤仙花等。

2．二年生花卉：在二年内完成其生长、发育、开花、结实、直至死亡的生命周期。即秋天播种、幼苗越冬、翌年春夏开花、结实、后枯死，故又称秋播花卉。如金鱼草、三色堇、桂竹香、羽衣甘蓝、金盏菊、雏菊、风铃草、须苞石竹、矮雪轮、矢车菊等。�

3．多年生花卉：指这种花卉它的地下茎和根连年生长，地上部分多次开花、结实，

即其个体寿命超过两年。又因其地下部分的形态不同，可分为两类。�

（1）宿根花卉：地下部分的形态正常，不发生变态现象；地上部分表现出一年生或多年生性状，如菊花、蓍草属、紫菀属、金鸡菊、宿根天人菊、、金光菊、紫松果菊、一枝黄花、蛇鞭菊、芍药、乌头、耧斗菜、铁线莲、荷苞牡丹、蜀葵、福禄考、剪秋罗、随意草、桔梗、沙参、费菜、鸢尾属、射干、火炬花、萱草、玉簪、万年青、吉祥草、麦冬、沿阶草等。

（2）球根花卉：地下部分的根或茎发生变态，肥大呈球状或块状等，如郁金香、风信子、葡萄风信子、贝母、百合、绵枣儿、大花葱、铃兰、秋水仙、白芨、水仙、石蒜、葱兰、韭兰、晚香玉、唐菖蒲、球根鸢尾、火星花、番红花、美人蕉、大丽花、花毛茛、红花酢浆草，因其形态不同，可分为以下几类：鳞茎类、球茎类、块茎类、根茎类、块根类。

4．水生花卉：指生长在水中或沼泽地或耐水湿的花卉。常见的如荷花、睡莲、萍蓬草、芡、千屈菜、菖蒲、黄菖蒲、香蒲、水葱、凤眼莲等。

5．岩生花卉：指耐旱性强，适合在岩石园栽培的花卉，如虎耳草、香堇、蓍草、景天类等。

6．草坪地被花卉：主要指覆盖地表面的低矮的、具匍匐状、质地优良、扩展性强禾本科植物、莎草科植物以及一些多年生适应性强的其它草本植物和茎叶密集的低矮灌木、竹类、藤本植物等。如结缕草、马尼拉、细叶结缕草、狗牙根、百慕达、天堂草、假俭草、早熟禾、高羊茅、紫羊茅、匍匐剪股颖（四季青）、黑麦草、多年生黑麦草、白三叶、红三叶、马蹄金等。

（二）温室花卉

原产热带、亚热带及南方温暖地区的花卉，在北方寒冷地区栽培必须在温室内培育，或冬季须在温室内保护越冬。通常可分为下面几类。

1．一、二年生花卉：如瓜叶菊、蒲包花、彩叶草、报春花等。

2．宿根花卉：如非洲紫罗兰、鹤望兰、百子莲、非洲菊、花叶竹芋、蜘蛛抱蛋等。

3．球根花卉：如仙客来、香雪兰、马蹄莲、大岩桐、球根秋海棠、彩叶芋等。

4．兰科植物：依其生态习性不同，又可分为地生兰类：如春兰、蕙兰、建兰、墨兰、寒兰等；附生兰类：如卡特兰、蝴蝶兰、石斛、兜兰等。

5．多浆植物：指茎叶具有特殊贮水能力，呈肥厚多汁变态状的植物，并能耐干旱。如仙人掌、蟹爪兰、昙花、芦荟、绿铃、生石花、玉米石、龙凤木、龙舌兰等。

6．蕨类植物：又称羊齿植物，如铁线蕨、肾蕨、巢蕨、鹿角蕨等。

7．食虫植物：如猪笼草、捕蝇草、瓶子草等。

8．凤梨科植物：如彩叶凤梨、虎纹凤梨、金边凤梨、筒凤梨等。

9．草木本植物：又称亚灌木花卉，如倒挂金钟、香石竹、天竺葵、竹节海棠等。

10．花木类：如一品红、龙血树、龟背竹、米仔兰、珠兰等。

11．水生花卉：如王莲、热带睡莲。

植物组织培养小论文方向

文章标题：论植物组织培养褐变产生的因素及对策

摘要:本文针对植物组织培养中常见的褐变现象,详细地分析了其产生的机理及影响因素,并提出了相应的对策,为科研和生产提供了一定的理论和实践依据。

关键词:植物组织培养，褐变，对策

目前，在许多植物组织培养过程中，常遇到褐变问题。褐变主

要发生在外植体，在植物愈伤组织的继代、悬浮细胞培养以及原生质体的分离与培养中也经常发生。褐变产物不仅使外植体、细胞、培养基等变褐，而且对许多酶有抑制作用，从而影响培养材料的生长与分化，严重时甚至导致死亡。本文探讨植物组织培养中褐变现象的影响因素、机理及防范措施，对我们进行科学研究或工厂生产，包括植物组织的培养,原生质体、悬浮细胞和植物器官的培养都有着十分重要的现实意义。

1褐变产生的影响因素

影响植物组织培养褐变的因子是复杂的，因植物的种类、基因型、外植体部位及生理状态等不同，褐变的程度也有所不同。

1.1植物种类及基因型不同的植物和不同的基因型决定了不同的褐化程度。在组织培养中，品种褐化难易可能是与该品种中多酚类物质含量的多少及多酚氧化酶(PPO)活性的差异有关。

1.2外植体部位及生理状态外植体的部位及生理状态不同其褐化程度不同，同时，不同时期和不同年龄的外植体在培养中褐变的程度也不同。

1.3培养基成分培养基成分中的无机盐、蔗糖浓度、激素水平等对褐变的程度的影响尤为重要。另外，其pH值也与褐变程度有较大关系。

1.4培养条件温度过高或光照过强，均可加速被培养组织的褐变。不利环境条件都能造成细胞的程序化死亡，温度是诱导程序化死亡的主要因素[1]。

2褐变产生的机理

2.1非酶促褐变

非酶促褐变是由于细胞受胁迫或其他不利条件影响所造成的细胞程序化死亡或自然发生的细胞死亡，即坏死形成的褐变现象，并不涉及酚类物质的产生。徐振彪等[1]将生长正常的愈伤组织转移到含NaCl的培养基中，组织周围尤其是接触培养基部分发生褐变，但培养基中没有看到扩散的褐化物质。当温度升高时继代保存时间过长，也会发生此类现象。但这种褐变若采取适当措施或者愈伤组织适应了胁迫环境就不再发生了[3]。

2.2酶促褐变

目前认为植物组织培养中的褐变主要是由酶促褐变引起的，培养材料变褐主要是由伤口处分泌的酚类化合物引起的[4]。酶促褐变如同一般的酶促反应，其发生必须具备三个条件，即酶、底物和氧。引起褐变的酶有多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶等。从初次培养和继代培养过程中试管苗的褐变程度和PPO的活性来看，表明PPO活性的高低是引起培养材料褐变的关键。引起褐变的酶的底物主要是酚类化合物，按其组成可分成3类:苯基羧酸（包括邻羟基苯酚、儿茶酚、没食子酸、莽草酸等），苯丙烷衍生物（包括绿原酸、肉桂酸、香豆酸、咖啡酸、单宁、木质素等），第三类是黄烷衍生物（包括花青素、黄酮、芸香苷等），但并非所有的酚类物质都是PPO的底物。

在正常发育的植物组织中,底物、氧气、PPO同时存在并不发生褐变，是因为在正常的组织细胞内由于多酚类物质分布在细胞的液泡内，而PPO则分布在各种质体或细胞质中，这种区域性分布使底物与PPO不能接触。而当细胞膜的结构发生变化和破坏时，则为酶创造了与PPO接触的条件，在氧存在的情况下使酚类物质氧化成醌，进行一系列的脱水、聚合反应，最后形成黑褐色物质，从而引起褐变。

3防止外植体产生褐变的对策

从理论上讲,酶促褐变可以通过以下三种方法加以抑制:一是除去引起氧化的物质——氧；二是捕捉或减少聚合反应的中间产物；三是抑制有关的酶。实际操作上，下列措施是被认为行之有效的。

3.1适当外植体的选择

取材时应注意选择褐变程度较小的品种和部位作外植体。成年植株比幼苗褐变程度厉害，夏季材料比冬季及早春和秋季材料的褐变要严重。冬季的芽不易生长，宜选用早春和秋季的材料作为外植体。王异星[5]用荔枝无菌苗不同组织的诱导试验表明，茎最容易诱导出愈伤组织，培养2周后长出浅黄色的愈伤组织；叶大部分不能产生愈伤组织或诱导出的愈伤组织中度褐变；而根极大部分不产生愈伤组织，诱导出的愈伤组织全部褐变。

3.2对外植体的处理

通过对较易褐变的外植体材料的预处理能减轻醌类物质的毒害作用。处理方法如下：外植体经流水冲洗后，在2-5℃的低温下处理12-24小时，再用升汞或70酒精消毒，然后接种于只含有蔗糖的琼脂培养基中培养5-7天，使组织中的酚类物质部分渗入培养基中。取出外植体用0.1漂白粉溶液浸泡10分钟，再接种到合适的培养基中。若仍有酚类物质渗出，3-5天后再转移培养基2-3次，当外植体的切口愈合后，酚类物质减少，这样可使外植体褐变减轻或完全被抑制。何琼英等[6]用抗坏血酸预处理香蕉吸芽外植体，能减轻外植体褐变，从而提高芽丛诱导率。

3.3适宜的培养基

培养基的成分与褐变程度有关，要考虑所选培养基的状

态和类型。

3.3.1适当的无机盐浓度张妙霞等[7]在柿树组织培养防止褐变所进行的试验中，4种培养基的无机盐以改良MS(大量元素减半)和1/2MS的效果最好，MS的效果较差，结果证明低浓度的无机盐可促进外植体的生长与分化，减轻外植体褐变的程度。徐振彪[1]在对玉米幼胚耐NaCl愈伤组织的筛选表明，随NaCl浓度升高，褐变现象加重。

3.3.2适当和适量的激素王异星[5]在荔枝的组织培养过程中，培养基中添加1mg/LBA 0.5mg/L2,4-D时，愈伤组织较坚硬，增殖缓慢，易产生褐变。培养基中添加1mg/LBA 1mg/L2,4-D时，愈伤组织浅黄疏松，增殖也快。

3.3.3培养基的硬度在一定范围内，琼脂用量大，培养基硬度大，褐变率低[8]，这可能是培养基的硬度影响了酚类物质的扩散速度的缘故。

3.3.4培养基中水的硬度的影响硬度低的蒸馏水褐变率低,而使用硬度较高的自来水,褐变严重,甚至会出现褐变死亡[8]。这可能是配制培养基的水改变了培养基中无机盐的浓度,间接地影响了植物外植体的褐变。

3.3.5培养基的pH值在水稻体细胞培养中，pH值为4.5-5.0时MS液体培养基可保持愈伤组织处于良好的生长状态，其表面呈黄白色，而pH值为5.5-6.0时，愈伤组织严重褐变[9]。一般来说，酸性环境(pH值为4.5-5.0)不利于褐变过程的发生[10]。

3.3.6培养条件如温度过高或光照过强，光照会提高PPO的活性，促进多酚类物质的氧化，从而加速被培养的组织褐变。高浓度CO2也会促进褐变，其原因是环境中的CO2向细胞内扩散，细胞内CO32-增多，CO32-与细胞膜上的CO32-结合，使有效CO32-减少，导致内膜系统瓦解，酚类物质与PPO相互接触，产生褐变[11]。 初期培养要在黑暗或弱光下进行。

3.4添加褐变抑制剂和吸附剂

褐变抑制剂主要包括抗氧化剂和PPO抑制剂。在培养基中加入偏二亚硫酸钠、L-半胱氨酸、抗坏血酸、柠檬酸、二硫苏糖醇等抗氧化剂都可以与氧化产物醌发生作用，使其重新还原为酚[12]。由于其作用过程均为消耗性的，在实际应用中应注意添加量，其中L-半胱氨酸和抗坏血酸均对外植体无毒副作用，在生产应用中可不受限制。在水稻细胞的培养基中，添加植酸(PA)，可防止褐变，PA分子中众多的羟基产生抗氧化作用，使生色物质的含量下降或PA与PPO分子中的Cu2结合，从而降低了其活力。陈学森等[13]在对植酸在银杏组织培养中应用的研究中也证实了植酸具有抑制多酚氧化酶活性的作用。

常用的吸附剂有活性炭和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。活性炭是一种吸附性较强的无机吸附剂，能吸附培养基中的有害物质，包括琼脂中的杂质、培养物在培养过程中分泌的酚、醌类物质以及蔗糖在高压消毒时产生的5-羟甲基糠醛等,从而有利于培养物的生长。粉末状的活性炭与颗粒状的活性炭相比吸附性更强，一般在培养基中加入1-4g/L的活性炭。在使用过程中应注意，尽量用最低浓度的活性炭来对抗褐变的产生，因为活性炭的吸附作用是没有选择性的，在吸附物质的同时，也会吸附培养基中的其他成分，对外植体的诱导分化会产生一定的负面影响[14]。而聚乙烯吡咯烷酮(PVP)是酚类物质的专一性吸附剂，在生化制备中常用作酚类物质和细胞器的保护剂，可用于防止褐变[15]。

3.5进行细胞筛选和多次转移

在组织培养过程中，经常进行细胞筛选，可以剔除易褐变的细胞。在外植体接种1-2天后应立即转移到新鲜培养基中，能减轻酚类物质对培养物的毒害作用，降低抑制作用，使外植体尽快分生，连续转移5-6次，可基本解决外植体的褐变问题。

参考文献：

[1]徐振彪等.植物组织培养过程中的褐化现象.国外农学——杂粮作物,1997(1):55～56.

[2]符近.三种不同类型种子休眠萌发及马占相思种子老化过程的研究.北京农业大学硕士研究生论文,1996.

[3]傅作申，玉米耐NaCl幼胚愈伤组织的筛选及特性分析，长春农牧大学硕士论文，1996.

[4]颜昌敏编著，植物组织培养手册，上海科学技术出版社,1990.

[5]王异星.荔枝细胞培养的初步研究.暨南大学学报,1997,18(5)：84～85.

[6]何琼英等.抗坏血酸预处理阻止香蕉吸芽外植体褐变的研究初报.华南农业大学学报,1995,16(3):79～82.

[7]张妙霞.柿树组织培养防止外植体褐变的研究.河南农业大学学报,1999,33(1):87～91.

[8]金坚敏.水稻幼穗和成熟种子诱导胚状体时的有关因子探讨.植物学通报，1992,9(2):53～54.

[9]金坚敏.水稻幼稿和成熟种子诱导胚状体时的有关因子探讨.植物学通报,1992.

[10]王东霞等,如何对抗植物组织中的组织褐变，中国花卉盆景,2025,12:29～30.

[11]姚洪军,罗晓芳,田砚亭.植物组织培养外植体褐变的研究进展.北京林业大学学报,1999,21(3):78～83.

[12]蔡金星等.不同品种梨多酚氧化酶特性及其抑制剂的研究.河北农业技术师范学院学报,1999,13(1):55～57.

[13]陈学森,张艳敏等，植酸在银杏组织培养中应用的研究.天然产物研究与开发,1997,9(2):24～27.

[14]刘用生.植物组织培养中活性炭的使用.植物生理学通讯,1994,30(3):214.

[15]姚洪军等.植物组织培养外植体褐变的研究进展.北京林业大学学报,1999,21(3):78～84.

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植物组织培养

植物组织培养即植物无菌培养技术，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官、组织或细胞，如根、茎、叶、花、果实、种子、胚、胚珠、子房、花药、花粉以及贮藏器官的薄壁组织、维管束组织等，在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株。至今，世界各国在无性系繁殖、花卉育种、植株脱病毒和种质保存等方面，广泛应用组织培养技术。

（一）组织培养技求的应用

1．无性系繁殖无性系繁殖是植物组织培养应用的主流之一，用植物组织培养进行无性繁殖的优点是，用材少，速度快，不受气候、季节、基质等自然条件的影响，比传统的常规繁殖方法要快得多，人们又叫它'快速繁殖'或'微型繁殖'。其常见繁殖方式有短枝扦插、芽增殖、原球茎、器官分化和胚状体发生。其中芽增殖在盆栽花卉繁殖中应用最为普遍，如草本植物四季秋海棠、鸡冠花、万寿菊、长春花，观叶植物蟆叶秋海棠、网纹草、花叶芋、天鹅绒竹芋，木本植物三角花、比利时杜鹃、月季、八仙花等，在生产实践中，均已取得较好的经济效益。原球茎培养在大花蕙兰、蝴蝶兰、美丽兜兰、石斛、春兰等兰科植物和肾蕨、凤尾蕨、鹿角蕨等观赏蕨的规模性生产中得到广泛应用。胚状体培养，据报道目前已在30个科150种植物上观察到它们的愈伤组织可以分化出胚状体，而盆栽花卉中的花叶芋、山茶花都是成功的范例。器官分化主要是从外植体直接产生不定芽或不定根，一般不通过从愈伤组织进行器官分化形成植株，因为其性状有可能发生变化或经过多次继代培养后，会丧失再生植株的能力。

2．花卉育种当今盆栽花卉育种中，也广泛应用组培技术。

胚培养：在花卉种间杂交或远缘杂交中，有时虽然能正常受精，但胚往往发育不完全或胚与胚乳间不亲和，不能得到种子，可采用胚的早期离体培养促使胚正常发育，培养出杂交后代。如山茶花、百合和鸢尾杂交中均采用幼胚培养，成功地收到了杂交种子。同时，在杂交中受精困难，也可把未受精的胚珠分离出来，在试管内用花粉受精来解决，这在草本花卉花菱草中已取得成功。

单倍体育种：利用花药培养诱导花粉形成单倍体，在试管培养中通过秋水仙素处理，使染色体加倍，而成为纯合二倍体植物，从而缩短新品种育种的时间，还有利于突变中隐性突变的分离。这在花卉的株型、花色、花型的大小或重瓣，叶型、叶色等产生变异，往往有直接利用价值。这在矮牵牛的育种中已应用。

体细胞杂交和植物基因工程：利用原生质体遗传操作技术，可以从原来不大可能进行杂交的不同属植物间获得体细胞杂种或核质杂种。可以通过摄取外源目的基因，定向改造植物的某些重要性状。

3．植株脱病毒用无性繁殖方法来繁衍的花卉种类如菊花、香石竹、郁金香、百合、白鹤芋等，不能通过种子途径去除病毒，用化学方法防治和高温处理往往成效不稳定。作为组织培养的无性繁殖材料，最好是去病毒组织，否则易导致病毒积累，危害加重。而植物的茎尖部分无维管束，病毒难以侵入。所以，茎尖培养是获得无病毒植株的最好途径。至今，茎尖培养脱毒法已在菊花、百合、香石竹、郁金香等盆栽花卉上推广使用。

4．种质保存用无性繁殖的植物，因没有种子，只能在植物园内长期栽培保存，耗费大量的土地和劳力。种质材料还易受自然环境的变化和病虫危害而流失。若用组织培养方法，保存愈伤组织、胚状体、茎尖等组织，可节省大量人力和物力。

（二）组织培养的几个步骤

1．材料的选用一般用于组织培养的材料称为外植体。常分为两类。一类是带芽的外植体，如茎尖、侧芽、鳞芽、原球茎等，组织培养过程中可直接诱导丛生芽的产生。其获得再生植株的成功率较高，变异性也较小，易保持材料的优良性状。另一类主要是根、茎、叶等营养器官和花药、花瓣、花轴、花萼、胚珠、果实等生殖器官。这一类外植体需要一个脱分化过程，经过愈伤组织阶段，再分化出芽或产生胚状体，然后形成再生植株。

外植体的取用与组织部位、植株年龄、取材季节以及植株的生理状态、质量，都对培养时器官的分化有一定影响。一般阶段发育年幼的实生苗比发育年龄老的栽培品种容易分化，顶芽比腋芽容易分化，萌动的芽比休眠芽容易分化。在组织培养中，最常用的外植体是茎尖，通常切块在0．5厘米左右，太小产生愈伤组织的能力差，太大则在培养瓶中占据空间太多。培养脱毒种苗，常用茎尖分生组织部，长度为0．1毫米以下。

2．外植体的消毒植物组培能否取得成功的重要因素之一，就是保证培养物在无菌条件下安全生长。为此，必须抓好外植体的消毒和实行无菌操作。

由于培养的植物材料大都采集于田间栽培植株，材料上常附有各种微生物，一旦被带入培养基，即会迅速繁殖滋长，造成污染，培养失败。所以培养前必须对外植体进行严格的消毒处理，消毒的尺度为既能全都杀灭外植体上附带的微生物，但又不伤害材料的生活力。 必须正确选择消毒剂和使用的浓度、处理时间及程序。目前，常用的消毒剂有次氯酸钙、氯化汞、次氯酸钠、双氧水、酒精（70％）等。具体消毒方法如下：

（1）茎尖、茎、叶片的消毒消毒前先用清水漂洗干净或用软毛刷将尘埃刷除，茸毛较多的用皂液洗涤，然后再用清水洗去皂液，洗后用吸水纸吸干表面水分，用70％酒精浸数秒钟，取出后及时用10％次氯酸钙饱和上清液浸泡10～20分钟。或用2％～10％次氯酸钠溶液浸泡6～15分钟。消毒后用无菌水冲洗3次，用无菌纱布或无菌纸吸干接种。

（2）根、块茎、鳞茎的消毒这类材料大都生长在土中，常带有泥土，挖取时易遭损伤。消毒前必须先用净水清洗干净，在凹凸不平处以及鳞片缝隙处，均用毛笔或软刷将污物清除干净，用吸水纸吸干后，在70％酒精中浸一下，然后用6％～10％次氯酸钠溶液浸5～15分钟，或用0．1％～0．2％氯化汞消毒5～10分钟，最后用无菌水清洗3～4次，用无菌纱布或无菌纸吸干后接种。

（3）果实、种子的消毒这类材料有的表皮上具有茸毛或蜡质，消毒前先用70％酒精浸泡几秒钟或2～10分钟，然后用饱和漂白粉上清液消毒10～30分钟或2％次氯酸钠溶液浸10～20分钟，消毒后去除果皮，取出内部组织或种子接种。直接用种子或果实消毒，经消毒后的材料均须用无菌水多次冲洗后接种。

（4）花药、花粉的消毒植物的花药外面常被花瓣、花萼包裹着，一般处于无菌状态，只需采用表面消毒即可接种。通常先用70％酒精棉球擦拭花蕾或叶鞘，然后将花蕾剥出，在饱和漂白粉上清液中浸泡10～15分钟，用无菌水冲洗2～3次，吸干后即可接种。

3．组织培养的条件接种后的培养容器置放培养室，室温应控制在23～26℃，每天12～16小时光照，光照度为1000～3000勒克斯。

4．外植体的增殖接种后的外植体要分化出丛状芽、愈伤组织或胚状体，必须对培养基及激素的种类和浓度进行严格的设计和筛选。常用的基本培养基为MS培养基，激素的种类和浓度对外植体的分化和增殖起到重要的作用。也就是说不同的花卉种类对激素的种类和浓度是有差别的（表4－－3）。

5．诱导生根继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有根，要促使试管苗生根，必须转移到生根培养基上，生根培养基一般应用1／2MS培养基，因为降低无机盐浓度有利于根的分化。同时，不同盆栽花卉诱导生根时所需要的生长素的种类和浓度是不同的（表4－4）。一般常用吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）和吲哚丁酸（IBA）三种。一般在生根培养基中培养1个月左右即可获得健壮根系。

6．组培苗的移栽生根或形成根原基的试管苗从无菌，温、光、湿度稳定环境中进入到自然环境中，从异养过渡到自养过程，必须经过一个炼苗过程。首先打开试管瓶塞放阳光充足处让其锻炼1～2天，然后取出幼苗用温水将琼脂冲洗掉，移栽到泥炭、珍珠岩、蛭石、砻糠灰等组成的基质中，基质使用前需高温消毒，移栽后要适当遮荫，可用塑料薄膜覆盖，保持较高空气湿度，温度维持在25℃左右，勿使阳光直晒，7～10天后要注意通风和补充浇水，约20～40天，新梢开始生长后，小苗可转入正常管理。